تست‌های آزمایشگاهی برای تشخیص کووید-19 که در حال حاضر در عمل طبق توصیه‌های مجامع بین‌المللی متخصصان انجام می‌شود، بررسی و ارزیابی می‌شوند.
COVID-19 مرضکه از ووهان چین سرچشمه گرفته است، تاکنون بیش از 208 کشور را تحت تاثیر قرار داده است. جامعه علمی در سراسر جهان در چند ماه گذشته با چالش مهمی برای توسعه مواجه شده است تست های تشخیصی برای Covid-19 تشخیص بیماری به منظور غربالگری بیماران و افراد مشکوک به منظور مدیریت و کنترل موثر بیماری همه گیر.
قبل از ارزیابی روش‌ها و شیوه‌های فعلی مورد استفاده برای تشخیص COVID-19، اجازه دهید ابتدا بفهمیم که چه چیزی باعث COVID-19 می‌شود و چگونه می‌توان آزمایش‌های تشخیصی برای غربالگری بیماران از نظر این بیماری ایجاد کرد. بیماری COVID-19 توسط یک RNA رشته مثبت ایجاد می شود ویروس که زئونوز هستند، به این معنی که می توانند از موانع گونه ها از حیوانات به انسان عبور کنند و در انسان باعث ایجاد بیماری هایی از سرماخوردگی معمولی تا بیماری های شدیدتر مانند مرس و سارس شوند. ویروس عامل COVID-19 اکنون توسط کمیته بین المللی طبقه بندی ویروس ها (ICTV) SARS-CoV-2 نامیده شده است، زیرا بسیار شبیه به ویروسی است که باعث شیوع SARS (SARS-CoVs) شده است. تست تشخیصی بیماری کووید-19 را می توان به روش های مختلفی توسعه داد.
محبوب ترین و در حال حاضر پذیرفته شده در سراسر جهان، ایجاد یک آزمایش تشخیصی است که می تواند خود ویروس SARS-CoV-2 را تشخیص دهد. این آزمون بر اساس تشخیص ژنوم ویروس در نمونه بیمار توسط RT-real time PCR (واکنش زنجیره ای پلیمراز رونوشت معکوس-زمان واقعی) است. این امر مستلزم تبدیل RNA ویروسی به DNA با استفاده از آنزیمی به نام ترانس کریپتاز معکوس و سپس تقویت DNA با استفاده از مجموعه خاصی از آغازگرها و یک پروب فلورسنت است که با استفاده از یک پلیمراز Taq و تشخیص سیگنال فلورسنت به ناحیه خاصی روی DNA ویروسی متصل می شود. به این آزمایشات NAAT (تست های تقویت اسید نوکلئیک) می گویند. این تکنیک می تواند برای تشخیص زودهنگام وجود اسید نوکلئیک در نمونه بیمار، حتی در بیماران بدون علامتی که علائم بیماری کووید-19 را نشان نمی دهند (به ویژه در دوره کمون 14-28 روزه) و در قسمت بعدی بسیار مفید باشد. و همچنین زمانی که بیماری به طور کامل بروز می کند.
شرکت‌های مختلف در سراسر جهان در چند ماه گذشته در رقابت با زمان برای توسعه آزمایش تشخیصی مبتنی بر NAAT برای تشخیص SARS-CoV-2 بر اساس CDC (مرکز کنترل بیماری)، آتلانتا، ایالات متحده آمریکا و دستورالعمل‌های WHO کار کرده‌اند. 1، 2). مقامات بهداشتی در سراسر جهان این آزمایش‌ها را برای استفاده اضطراری برای تشخیص SARS-CoV-2 تأیید کرده‌اند. ژن‌های ویروسی مورد هدف تاکنون شامل ژن‌های N، E، S و RdRP به همراه کنترل‌های مثبت و منفی مناسب هستند. نمونه‌های بیمار که برای چنین آزمایشی جمع‌آوری می‌شوند، از دستگاه تنفسی فوقانی (سواب نازوفارنکس و اوروفارنکس) و/یا دستگاه تنفسی تحتانی (خلط و/یا آسپیراسیون داخل تراشه یا لاواژ برونکوآلوئولار) هستند. با این حال، تشخیص ویروس در نمونه های دیگر از جمله مدفوع و خون نیز امکان پذیر است. نمونه‌ها باید به سرعت و به شیوه‌ای مناسب و با رعایت تمام اقدامات احتیاطی لازم و رعایت شیوه‌های ایمنی زیستی (طبق دستورالعمل‌های تعیین‌شده توسط WHO[1])، از بیمارانی که دارای تعریف مورد مشکوک برای COVID-19 هستند، جمع‌آوری شوند و آن را نگهداری و بسته‌بندی کنند. خوب اگر لازم باشد به مرکز تشخیص منتقل شود و سپس پردازش شود (استخراج RNA در یک کابینت ایمنی زیستی در یک BSL-2 یا تاسیسات معادل آن) به روشی که از یکپارچگی نمونه اطمینان حاصل شود. همه اینها باید بر اساس اولویت برای مدیریت بالینی بهتر و کنترل شیوع بیماری انجام شود.
زمان تشخیص آزمایش‌های مختلف مبتنی بر NAAT که توسط شرکت‌های بزرگ تشخیصی در سراسر جهان توسعه یافته‌اند، از 45 دقیقه تا 3.5 ساعت متغیر است. پیشرفت‌های مختلفی در این آزمایش‌ها انجام می‌شود تا آنها را به تست‌های مراقبتی تبدیل کرده و در کمترین زمان ممکن به نتایج مطلوب دست پیدا کنید بدون اینکه دقت نتیجه به خطر بیفتد تا تعداد آزمایش‌هایی که می‌توان در یک روز انجام شود افزایش داد.
سایر گزینه های تست تشخیصی هستند تست های تشخیص سریع (RDTs) که یا آنتی‌ژن‌ها/پروتئین‌های ویروسی را که در سطح ذرات ویروس SARS-CoV-2 بیان می‌شوند، هنگام تکثیر در سلول‌های میزبان و ایجاد بیماری یا آنتی‌بادی‌های میزبان در پاسخ به عفونت، شناسایی می‌کنند. این آزمایش وجود آنتی بادی ها را در خون افرادی که گمان می رود به COVID-19 آلوده شده اند را تشخیص دهد (3).
دقت و تکرارپذیری RDT برای تشخیص آنتی ژن های ویروسی به عوامل مختلفی از جمله زمان شروع بیماری، غلظت ویروس در نمونه، کیفیت و پردازش نمونه و فرمولاسیون معرف های موجود در کیت های آزمایش بستگی دارد. با توجه به این متغیرها، حساسیت این تست ها ممکن است از 34% تا 80% متغیر باشد. یک اشکال عمده این گزینه این است که ویروس باید در مرحله تکثیر و عفونی خود باشد تا بتواند پروتئین های ویروسی را شناسایی کند.
به طور مشابه، آزمایش‌های تشخیص آنتی‌بادی میزبان بر اساس قدرت پاسخ آنتی‌بادی است که به عواملی مانند سن، وضعیت تغذیه، شدت بیماری و برخی داروها یا عفونت‌هایی که سیستم ایمنی را سرکوب می‌کنند، بستگی دارد. یک اشکال عمده این گزینه این است که آنتی‌بادی‌ها طی روزها تا هفته‌ها پس از ابتلا به ویروس SARS-CoV-2 تولید می‌شوند و برای انجام آزمایش باید آنقدر صبر کرد. این بدان معنی است که تشخیص عفونت COVID-19 بر اساس پاسخ آنتی بادی میزبان اغلب فقط در مرحله بهبودی امکان پذیر است، زمانی که بسیاری از فرصت ها برای مداخله بالینی یا پیشگیری از انتقال بیماری از قبل گذشته باشد.
در حال حاضر، RDT های ذکر شده در بالا تنها در یک محیط تحقیقاتی و نه برای تشخیص بالینی به دلیل کمبود داده تایید شده اند (3، 4). همانطور که اطلاعات اپیدمیولوژیک بیشتر و بیشتری برای COVID-19 در دسترس قرار می گیرد، RDT های بیشتری به عنوان تست های مراقبتی در یک محیط بالینی ایجاد و تایید می شوند زیرا می توانند در عرض 10 تا 30 دقیقه به نتیجه برسند برخلاف آزمایش های مبتنی بر NAAT که به طور متوسط طول می کشد. چند ساعت برای تشخیص بیماری
***
منابع:
1. WHO، 2020. توصیه‌های استراتژی آزمایش آزمایشگاهی برای COVID-19. راهنمایی موقت 21 مارس 2020. در دسترس آنلاین در https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf مشاهده شده در 09 آوریل 2020
2. CDC 2020. اطلاعات برای آزمایشگاه ها. راهنمای موقت برای آزمایشگاه ها به صورت آنلاین در دسترس است https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html دسترسی به 09 آوریل 2020.
3. WHO، 2020. مشاوره در مورد استفاده از آزمایشات نقطه مراقبت. خلاصه علمی 08 آوریل 2020. در دسترس آنلاین در https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 دسترسی به 09 آوریل 2020.
4. ECDC، 2020. مروری بر وضعیت آزمایش سریع برای تشخیص COVID-19 در اتحادیه اروپا/EEA. 01 آوریل 2020. مرکز اروپایی پیشگیری و کنترل بیماری. در دسترس آنلاین در https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea مشاهده شده در 09 آوریل 2020
***
